افزایش میزان بیان پروتئین متصل شونده به دافی در پلاسمودیوم ویواکس به عنوان پروتئین کاندید واکسن مرحله خونی مالاریا
نویسندگان
چکیده
چکیده سابقه و هدف: منطقه ii غنی از سیستئین پروتئین متصل شونده به دافی در پلاسمودیوم ویواکس (pvdbp-ii) نقشی اساسی در حمله مروزوئیت های انگل به اریتروسیت های انسان ایفا می نماید. به همین دلیل این پروتئین به عنوان پروتئین کاندید واکسن در بررسی پاسخ های ایمونولوژیکی مورد نظر محققین است. هدف از این مطالعه بیان پروتئین مذکور به میزان بالا با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی است. روش بررسی: پس از کلونینگ pvdbp-ii در وکتور pgem t easy، ساب کلونینگ در وکتورهای بیانی pet28a، pet24d و pqe30 انجام و بیان پروتئین در سویه های bl21(de3) و m15(prep4) اشرشیا کلی که محتوی ساختارهای بیانی ذکر شده بودند، تحت شرایط متفاوت ازجمله محیط کشت، دمای انکوباسیون و زمان های مختلف، بیان پس از القاء مورد بررسی قرار گرفت. خالص سازی به کمک روش متال افینیتی کروماتوگرافی تحت شرایط احیاء صورت گرفت و محصول توسط روش های sds-page و وسترن بلاتینگ مورد تائید قرار گرفت. در نهایت غلظت پروتئین خالص شده توسط دستگاه اسپکتروفتومتر در طول موج 280 نانومتر اندازه گیری شد. یافته ها: بیان rpvdbp-ii 4 ساعت پس از القاء با iptg 1میلی مولار در دمای 37 درجه سانتی گراد در محیط lb2x و با استفاده از سیستم بیانی m15-pqe30 به میزان قابل قبولی صورت گرفت ولی در دو سیستم بیانی bl21-pet28a و bl21-pet24d، بیان پروتئین مورد نظر به مقدار بسیار کم 200 مشاهده گردید. سایز پروتئین نوترکیب حاصل بر روی ژل طبق انتظار 47 کیلودالتون (اسید آمینه 588-198) بود. وسترن بلاتینگ با استفاده از آنتی بادی های anti-his و سرم افراد مبتلا به عفونت پلاسمودیوم ویواکس موید بیان pvdbp-ii بود و غلظت پروتئین حاصل 1200 میکروگرم در میلی لیتر ارزیابی شد. نتیجه گیری: در این مطالعه با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی e. coli (m15/bl21) و با انجام حداقل مراحل ترانسفورمیشن موفق به افزایش چشمگیر میزان بیان و دسترسی به فرم خالص و نوترکیب pvdb-ii بدون نیاز به انجام آزمایشات پیچیده و گران قیمت شدیم که این امر می تواند در طراحی واکسن منطقه ای علیه مالاریای ویواکس بسیار مفید و کارآمد باشد. واژگان کلیدی: پلاسمودیوم ویواکس، پروتئین متصل شونده به دافی، بیان، سیستم بیانی pqe30، e. coli.
منابع مشابه
افزایش میزان بیان پروتئین متصل شونده به دافی در پلاسمودیوم ویواکس به عنوان پروتئین کاندید واکسن مرحله خونی مالاریا
Abstract Background: The cysteine rich region II of Plasmodium vivax Duffy Binding Protein (PvDBP-II) is essential during merozoite invasion into the human erythrocyte and because of this biological importance, PvDBP-II is a vaccine candidate and a target for protective immunity against vivax malaria. In the present study we improved the yield of this protein by using E. coli (M15/BL21) expr...
متن کاملارزیابی پاسخ های آنتی بادی موش balb/c نسبت به دو فرم آللی پروتئین نوترکیب آنتیژن رأسی غشا-۱ پلاسمودیوم ویواکس به عنوان کاندید واکسن مالاریا
هدف: آنتی ژن رأسی غشا-۱ یکی از آنتی ژن های امید بخش کاندید مرحله خونی برای توسعه واکسن مالاریا علیه انگل پلاسمودیوم است. تنوع ژنتیکی در آنتی ژن های حفاظتی که پدیده ای معمول در یک انگل پیچیده مانند انگل پلاسمودیوم است، باعث ایجاد چالش در توسعه واکسنی مؤثر علیه مالاریا شده که این پدیده، توانایی انگل برای فرار از پاسخ های ایمنی را افزایش خواهد داد. از این رو توسعه واکسن مالاریا، نیازمند ارزیابی پا...
متن کاملبررسی ارتباط میزان بیان ژن پروتئین متصل شونده به عنصر تنظیمی استرول با پروفایل لیپیدی
Background and purpose: Atherosclerosis is a form of arteriosclerosis that is one of the main causes of death in the world. In coronary artery disease, the vessels are stenosed due to lipid aggregation and inflammation. Epidemiologic studies have shown that in addition to demographic factors such as age and sex, blood pressure, smoking, obesity diabetes and genetics are also associa...
متن کاملفراوانی و توزیع گونه های پلاسمودیوم ویواکس و پلاسمودیوم فالسیپارم و میزان پارازیتمی در مبتلایان به مالاریا
Background and Aim: Malaria is still one of the major health problems in comparison with any other parasitic disease in Iran with considerable economic and mortality consequences. Sistan-and-Baluchestan, Hormozgan and Kerman are the most affected provinces in the country approximately 96% of the cases are reported from these three provinces. The aim of this study was to determine the frequency,...
متن کاملپروتئین شوک حرارتی؛ کاندید واکسن سرطان
Background: Tumor cells express antigens that can be recognized by immune system as foreign particles. Heat shock proteins (HSPs) are molecular chaperones that bind to tumor antigens and mediate their uptake into antigen presenting cells. Methods: This articles is a review article and its data has been collected and categorized from the articles in the field of cancer immunotherapy. All the ar...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
پژوهش در پزشکیجلد ۳۶، شماره ۱، صفحات ۳۵-۴۲
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023